Клонирование и анализ генов легких цепей иммуноглобулинов стерляди 
Âîïðîñ
î òîì, íà
êàêîì ýòàïå
ôèëîãåíåçà
ïðîèçîøåë
ýòîò ïåðåõîä
îñòàåòñÿ
îòêðûòûì. Óæå
ó àìôèáèé
ãåíû ÈÃ L- è
Í-öåïåé
îðãàíèçîâàíû
ñåãìåíòàðíî.
Ïðè ýòîì, â
ñëó÷àå L-öåïåé
íàáëþäàåòñÿ
äâà
îñíîâíûõ
òèïà îðãàíèçàöèè:
êàïïà-ïîäîáíûé
(îäèí Ñ ãåí,
ñåìåéñòâî J
ñåãìåíòîâ è
ñåìåéñòâî V
ñåãìåíòîâ) è
ëÿìáäà
ïîäîáíûé
(íåñêîëüêî
ïàð JC è
ñåìåéñòâî V
ñåãìåíòîâ).
Ïî âñåé
âèäèìîñòè,
ðàçëè÷íûå
òèïû L-öåïåé
àìôèáèé
ïðîèçîøëè îò
ðàçëè÷íûõ
òèïîâ L-öåïåé
õðÿùåâûõ ðûá,
îäíàêî îòíîñèòåëüíî
íåâûñîêàÿ ãîìîëîãèÿ
ïî ïåðâè÷íîé
ñòðóêòóðå
íå ïîçâîëÿåò
óòâåðæäàòü
ýòîãî ñ
îïðåäåëåííîñòüþ
(Gilbert, 1990).
Ó
ñîìèêà è
ðàäóæíîé
ôîðåëè,
ïðåäñòàâèòåëåé
êîñòèñòûõ
ðûá,
îðãàíèçàöèÿ
ãåíîâ L-öåïåé
è Í-öåïåé
îòëè÷àåòñÿ.
Ãåíû Í-öåïåé
êîñòèñòûõ
ðûá
îðãàíèçîâàíû
ïîäîáíî
ìëåêîïèòàþùèì
ñåãìåíòàðíî
(Bengten et al., 1991).
Îðãàíèçàöèÿ
ãåíîâ L-öåïåé
èìååò
êëàñòåðíûé
õàðàêòåð. Â
òî æå âðåìÿ, â
îòëè÷èå îò
õðÿùåâûõ ðûá,
òðàíñêðèïöèîííàÿ
îðèåíòàöèÿ V
ãåíîâ ó íèõ
èçìåíåíà.
Ñëåäóåò
îòìåòèòü,
÷òî ñîìîâûå
è ëîñîñåâûå
ÿâëÿþòñÿ
äîâîëüíî ñïåöèàëèçèðîâàííîé
ãðóïïîé,
âîçíèêøåé â ýâîëþöèè
îòíîñèòåëüíî
íåäàâíî (Ðèñ. 8).
Îñîáåííîñòè
îðãàíèçàöèè
ãåíîâ
ëåãêèõ öåïåé
ó ýòèõ
òàêñîíîâ
ìîãóò
ïðåäñòàâëÿòü
ñîáîé
íîâîïðèîáðåòåííûå
ïðèçíàêè (Romer, 1966).
Â
ñâÿçè ñ ýòèì
îñîáûé
èíòåðåñ
ïðåäñòàâëÿåò
èçó÷åíèå
ñòðóêòðû è
îðãàíèçàöèè
ãåíîâ L-öåïåé
ÈÃ ó
êîñòíî-õðÿùåâûõ
ðûá. Êîñòíî-õðÿùåâûå
ÿâëÿþòñÿ
àðõàè÷íîé
ãðóïïîé êîñòèñòûõ
ðûá,
âîçíèêøåé
çíà÷èòåëüíî
ðàíüøå
íàñòîÿùèõ
êîñòèñòûõ.
Íåñìîòðÿ íà
òî, ÷òî
ñóùåñòâóþò
ðàçëè÷íûå
ìíåíèÿ
îòíîñèòåëüíî
ïîñëåäîâàòåëüíîñòè
ïîÿâëåíèÿ
êîñòíî-õðÿùåâûõ
è
äâîÿêîäûøàùèõ
(ïðåäêîâ
íàçåìíûõ
ïîçâîíî÷íûõ)
(Ðîìåð è Ïàðñîíñ,
1992; Þäêèí È. È., 1941),
î÷åâèäíî,
÷òî
êîñòíî-õðÿùåâûå
â áîëüøåé
ñòåïåíè ÷åì
êîñòèòñòûå ñîõðàíèëè
÷åðòû
äðåâíèõ
ïåðâè÷íî-êîñòíûõ
ðûá è,
ñîîòâåòñòâåííî,
ñ áîëüøèì
îñíîâàíèåì
ìîãóò
ðàññìàòðèâàòüñÿ
êàê ïðîìåæóòî÷íîå
çâåíî ìåæäó
õðÿùåâûìè
ðûáàìè è àìôèáèÿìè.
Ðèñ.
8.
Ýâîëþöèîííîå
äðåâî
íèçøèõ
ïîçâîíî÷íûõ
( ïî Ñåâåðöåâó
À. Í., 1939).
Îáîçíà÷åíèÿ:
- òàêñîíû,
èìåþùèå
íûíå æèâóùèõ
ïðåäñòàâèòåëåé,
- òàêñîíû,
ñóùåñòâîâàíèå
êîòîðûõ
äîêàçàíî
ïàëåîíòîëîãè÷åñêèìè
èññëåäîâàíèÿìè.
ÌÀÒÅÐÈÀËÛ
È ÌÅÒÎÄÛ
ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇ
ÄÍÊ
Â
àãàðîçíîì
ãåëå.
Ýëåêòðîôîðåç
ÄÍÊ
ïðîâîäèëè â 1%
àãàðîçíîì ãåëå
â 1-êðàòíîì
áóôåðå ÒÀÅ,
èìåþùåì
ñîñòàâ: 0.04 Ì
òðèñ-àöåòàò, 2
ìÌ Na2ÝÄÒÀ
(Ìàíèàòèñ è
äð., 1984).
Â
ïîëèàêðèëàìèäíîì
ãåëå.
Ýëåêòðîôîðåç
ÄÍÊ
ïðîâîäèëè â 6%
ïîëèàêðèëàìèäíîì
ãåëå â
0,5-êðàòíîì
áóôåðå ÒÁÅ,
èìåþùåì ñîñòàâ:
0,089 Ì
òðèñ-áîðàò, 0,089
Ì áîðíàÿ
êèñëîòà, 2 ìÌ Na2ÝÄÒÀ.
Äëÿ
ïîëèìåðèçàöèè
ãåëÿ ê 50 ìë
ðàñòâîðà
äîáàâëÿëè 300
ìêë 10%
ðàñòâîðà
ïåðñóëüôàòà
àììîíèÿ è 30
ìêë ÒÅÌÅÄ
(Ìàíèàòèñ è
äð., 1984).
ÂÛÄÅËÅÍÈÅ
ÄÍÊ ÈÇ ÃÅËß
Àäñîðáöèÿ
íà
äèýòèëàìèíîýòèëöåëëþëîçå.
Ãåëü
îêðàøèâàëè
â ðàñòâîðå
áðîìèñòîãî
ýòèäèÿ,
ó÷àñòîê
ãåëÿ ñ
ïîëîñîé ÄÍÊ
âûðåçàëè,
ïîìåùàëè â
êàìåðó è
ïåðåíîñèëè
ÄÍÊ íà äèýòèëàìèíîýòèëöåëëþëîçó
â 0,5-êðàòíîì
áóôåðå ÒÁÅ
(ñì.
Ýëåêòðîôîðåç
ÄÍÊ (2)) ïðè
íàïðÿæåíèè 40
Â/ñì. Ýëþöèþ
ÄÍÊ ñ
äèýòèëàìèíîýòèëöåëëþëîçû
ïðîâîäèëè
ïóòåì èíêóáèðîâàíèÿ
â òå÷åíèå 30
ìèí ïðè 70îÑ
â áóôåðå,
èìåþùåì
ñîñòàâ: 2 ìÌ NaCl, 1
ìÌ Na2ÝÄÒÀ, 40
ìÌ òðèñ ðÍ 8,0
(Ìàíèàòèñ è
äð., 1984).
Àäñîðáöèÿ
íà
êðåìíèåâîé
ïóäðå.
Àãàðîçíûé
ãåëü
îêðàøèâàëè
â ðàñòâîðå
áðîìèñòîãî
çòèäèÿ,
âûðåçàëè
ó÷àñòîê
ãåëÿ ñ ÄÍÊ è
ðàñïëàâëÿëè
èíêóáèðîâàíèåì
ñ äâîéíûì
îáúåìîì 6 Ì
ðàñòâîðà KI â
òå÷åíèå 10
ìèí ïðè 55îÑ.
Çàòåì
äîáàâëÿëè
ñóñïåíçèþ
êðåìíèåâîé
ïóäðû
(ñèëèêè) â 3 Ì
ðàñòâîðå KI â
êîíöåíòðàöèè
100 ìã/ìë èç
ðàñ÷åòà 300
ìêã ñèëèêè
íà 1 ìêã ÄÍÊ è
èíêóáèðîâàëè
â òå÷åíèå 2
ìèí ïðè 55îÑ.
Ïîñëå ýòîãî
îñàæäàëè
ñèëèêó
öåíòðèôóãèðîâàíèåì
ïðè 2000 g â
òå÷åíèå 2
ìèí è äâàæäû
ïðîìûâàëè
ñóñïåíäèðîâàíèåì
â ðàñòâîðå,
ñîäåðæàùåì 50
ìÌ NaCl, 10 ìÌ òðèñ-HCl,
ðÍ 8,0, 2,5 ìÌ Na2ÝÄÒÀ
è 50% ýòèëîâûé
ñïèðò.
Ýëþèðîâàëè
ÄÍÊ ñ ñèëèêè
ñóñïåíäèðîâàíèåì
â âîäå (Boyle, Lew, 1995).
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17
|
|
