Влияние циано- и тетразольных производных цитозина и тимина на резистентность эритроцитов

Рис. 2.7. Кинетика гемолиза крови крыс на фоне пятикратного введения цианоцитозина в разовой дозе 1 мг/100 г массы

1-5 – последовательность введения

исходная кривая

через 2,5 часа

через 24 часа

Рис. 2.8. Кинетика гемолиза эритроцитов крыс на фоне пятикратного введения цианоцитозина в разовой дозе 1 мг/100 г массы

1-4 – на 3, 5, 7 и 14 сутки соответственно

исходная гистограмма

после окончания введений веществ

В отставленные сроки тенденция к усилению сопротивляемости клеток к действию гемолитика сохраняется, однако выраженность эффекта уменьшается.

2.2.3. Влияние цитозинтетразола на резистентность эритроцитов

При исследовании крови животных, которым пятикратно вводили раствор цитозинтетразола было отмечено качественно иное изменение базовых физико-химических свойств эритроцитов. Усредненные данные по изменению показателей оптической плотности взвесей разрушающихся клеток крови соляной кислотой представлены в таблице 4 (Приложение). Изменение резистентности форменных элементов также иллюстрируют кислотные эритрограммы и кривые кинетики гемолиза (рис.2.9-2.12).

Согласно представленным материалам, под влиянием цитозинтетразола устойчивость эритроцитов существенным образом ослабилась. Тенденция к снижению способности клеток красной крови противостоять действию гемолитика обнаружилась уже на фоне первой инъекции тетразольного производного. Эффект нарастал с кратностью введений вещества (рис.2.9). После третьей инъекции ускорение процесса разрушения эритроцитов под действием соляной кислоты выразилось в сдвиге вершины кривой с 5.5 на 4,5 минуты (p<0,05) и смещение всей площади эритрограммы влево. Обращает на себя внимание некоторе расширение основания кривой, что означает удлинение общего времени гемолиза. После третьего и последующих введений оно увеличилось по сравнению с первоначальным на одну минуту, о чем свидетельствует смещение конца эритрограммы с 7 до 8 минут. Выраженность эффекта сохраняется не только до последнего введения вещества, но и в отставленные сроки наблюдений.

Способность цитозинтетразола понижать резистентность эритроцитов отражают также кривые кинетики гемолиза (рис.2.11, 2.12). Относительно исходного положения последующие кривые процесса гемолиза имеют более

Рис. 2.9. Кислотные эритрограммы крови крыс на фоне пятикратного введения цитозинтетразола в разовой дозе 1 мг/100 г массы

1-5 – последовательность введения

исходная гистограмма

через 2,5 часа

через 24 часа

Рис.2.10. Кислотные эритрограммы крови крыс в отставленные сроки наблюдения после пятикратного введения цитозинтетразола.

1-4 – на 3, 5, 7 и 14 сутки

исходная кривая

опытная кривая

Рис. 2.11. Кинетика гемолиза крови крыс на фоне пятикратного введения цитозинтетразола в разовой дозе 1 мг/100 г массы

1-5 – последовательность введения

Рис. 2.12. Кинетика гемолиза крови крыс на фоне пятикратного введения цитозинтетразола в разовой дозе 1 мг/100 г массы

1-4 – на 3, 5, 7 и 14 сутки соответственно

исходная кривая

после окончания введений веществ

крутую форму и сдвигаются влево. Как видно из графиков, начальный участок, соответствующий наличию в популяции эритроцитов малостойких клеточных форм, у интактных крыс находился  в интервале от 1,5 до 4.5 минут, а уже после третьего введения сдвигался до 3.5 минут. Как этот факт, так и более быстрое разрушение остаточной части эритроцитов в пробе, свидетельствуют о повышении в периферической крови количества мало- и среднестойких форменных элементов. Так до начала введений подопытным животным цитозинтетразола под влиянием соляной кислоты в пробе разрушились через 4.0 минуты 9%, а через 5.5 минут 66% эритроцитов. В пробах крови крыс сразу после третьего введения химического агента гемолитика вызывали разрушение на те же сроки уже 27 и 92% соответственно.

После прекращения инъекций цитозинтетразола функциональное состояние эритроцитов не восстанавливалось до конца проводимого исследования.

2.2.4. Влияние тиминтетразола на резистентность эритроцитов

В серии опытов с многократным введением животным тиминтетразола был получен аналогично рассмотренному у цитозинтетразола эффект ослабления резистентности (таблица 5, рис.2.13, 2.14).

Как иллюстрируют гистограммы, уже через 2.5 часа после первого введения исследуемого соединения наблюдалось смещение площади кривой в область меньших временных значений.

При последующих введений растворов вещества эффект усиливается вследствие перераспределения эритроцитов по степени стойкости к гемолитику. Максимум эритрограммы смещается с 5,5 на 4.5 минут.

Кривые гемолиза подтверждают полученный эффект снижения устойчивости эритроцитов после инъекций тиминтетразола (рис.2.15, 2.16). На протяжении всего периода введений вещества, а также в отставленные

Рис. 2.13. Кислотные эритрограммы крови крыс на фоне пятикратного введения тиминтетразола в разовой дозе 1 мг/100 г массы

1-5 – последовательность введения

исходная гистограмма

через 2,5 часа

через 24 часа

Рис.2.14. Кислотные эритрограммы крови крыс в отставленные сроки наблюдения после пятикратного введения тиминтетразола.

1-4 – на 3, 5, 7 и 14 сутки

исходная кривая

опытная кривая

Рис. 2.15. Кинетика гемолиза эритроцитов крыс на фоне пятикратного введения тиминтетразола в разовой дозе 1 мг/100 г массы

1-5 – последовательность введения

исходная гистограмма

через 2,5 часа

через 24 часа

Рис. 2.16. Кинетика гемолиза эритроцитов крыс на фоне пятикратного введения тиминтетразола в разовой дозе 1 мг/100 г массы

1-4 – на 3, 5, 7 и 14 сутки соответственно

исходная гистограмма

после окончания введений веществ

сроки наблюдений от ослаблении резистентности клеток крови свидетельствует смещение кривых процесса гемолиза влево по сравнению с фоновым положением. Анализ как эритрограмм, так и кривых кинетики гемолиза указывает на то, что время контакта эритроцитов с соляной кислотой до начала их разрушения заметно сокращалось. На усиление интенсивности лизиса эритроцитов указывает также тот факт, что к 4.5 минутам у интактных крыс под влиянием гемолитика разрушалось лишь 17%, тогда как уже после первого введения исследуемого соединения этот показатель возрос до 33% (таблица 5).

Однако следует обратить внимание на то, что в этих условиях , при снижении резистентности  эритроцитов, общее время лизиса могло несколько удлиниться с 7,5 до 8 минут, что по-видимому, означало появление в периферическом русле некоторого количества более стойких клеток. Такое явление может быть результатом компенсаторного усиления активности костного мозга, обусловленое влиянием продуктов лизиса эритроцитов [83].

2.3. Обсуждение результатов

Результаты проведенных исследований показали, что изучаемые производные пиримидиновых оснований оказали существенное влияние на функциональное состояние клеточных элементов крови крыс. Анализ кривых кинетики кислотного гемолиза и эритрограмм позволил определить влияние пиримидиновых соединений на характер распределения эритроциов по степени их устойчивости, а также на начало, интенсивность и завершение процесса их разрушения под действием повреждающего агента. Сравнительный анализ результатов исследования показал, что цитозин, цианоцитозин, а также тетразольные производные цитозина и тимина способны различным образом модулировать матричные свойства эритроцитов крови.

По схеме эксперимента мы остановились на дробном введении исследуемых веществ. Это обусловлено стремлением приблизить действие данных соединений к условиям длительного воздействия химических веществ на организм, как в промышленном производстве, так и при применении многих лекарственных препаратов.

Исследование цитозина не обнаружило заметного влияния на исходную способность эритроцитов противостоять действию гемолитика. Во все сроки наблюдения интенсивность разрушения красных клеток крови под действием соляной кислоты и общая продолжительность лизиса мало различались с первоначальными характеристиками и почти полностью совпадали с таковыми у контрольной группы животных. Включение в молекулу пиримидинового основания цианогруппы значительно увеличило его активность, выразившуюся в достаточно закономерном усилении резистентности эритроцитов. Следует заметить, что аналогичные данные были получены в отношении тимина, у которого при слабой собственной активности было отмечено повышение протекторных свойств в случае присоединения к молекуле цианового радикала [76].

Совершенно иную способность изменять функциональное состояние эритроцитов обнаружили пиримидиновые соединения с включением в их структуры тетразольного радикала. Во всех случаях цитозинтетразол и тиминтетразол ослабляли исходную базовую устойчивость эритроцитов к повреждающим воздействиям.

Поскольку вещества с общими носителями и разными радикалами в структуре молекулы различаются по своим свойствам, правомерно считать, что ответственными за изменение последних являются заместители. Полученные в настоящей работе данные подтверждают сложившееся у специалистов представление о зависимости эффекта действия вещества от особенностей его химической структуры.

Таким образом, сопоставление результатов обработки данных, полученных по производным гетероциклических соединений обнаружило способность одних (цитозин, цианоцитозин) усиливать, а других (цитозинтетразол, тиминтетразол) ослаблять исходную кислотную резистентность эритроцитов.

При обсуждении возможных механизмов влияния веществ необходимо учитывать ряд моментов. Как известно, природные пиримидиновые основания присутствуют во всех живых клетках в составе ДНК и РНК, являются структурными компонентами нуклеиновых коферментов, что определяет их участие во многих важных биохимических механизмах [7, 51, 55]. Это позволяет допускать, что биологически активные соединения, получаемые на основе их синтетических аналогов, способны влиять на клеточный метаболизм, стимулируя или угнетая течение биологических процессов [41, 49, 53, 90]. Согласно имеющимся сведениям костно-мозговая ткань характеризуется лабильностью и способностью изменять свою активность при различного рода воздействиях [19, 26, 66, 79]. В этой связи отмеченное в работе усиление или ослабление исходной сопротивляемости эритроцитов может быть обусловлено влиянием изучаемых пиримидиновых оснований на кроветворные органы  и, вследствие позитивного и негативного воздействия на эритропоэз,  выходом в периферическое русло клеток с измененными свойствами [48, 74, 75, 82]. Однако, по мнению специалистов, химические агенты, а производные азолов и пиримидинов в этом не исключение, в первую очередь действуют на уровне циркулирующих клеток крови, регулируя их устойчивость [54, 57, 70]. В условиях непосредственного контакта в периферическом русле химические вещества могут оказывать различное влияние на биохимические системы, ответственные за сохранение целостности мембран эритроцитов, при этом усиливая или ослабляя их генетически детерминированную резистентность. Такое различие эффектов может определяться влиянием на характер связей между белковыми и липидными компонентами мембраны, уровень активности ферментных систем клетки, уровень отрицательного заряда поверхности мембран и другими причинами [4, 11, 27, 29, 39].

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9